CONTENIDO EXTRA – ERRORES EN LAS MUESTRAS.
Grupo 4
Errores de corte: roturas y grosores variables.
Los desgarros y roturas en el tejido suelen ser de los errores más frecuentes en el procesamiento de muestras. Estos indican una mala técnica al procesar el tejido o pequeños fallos en el calibrado del equipo empleado en dicho procesamiento.
Puede ocurrir porque no haya habido una buena inclusión en el bloque de parafina, además de que puede haber estado caliente o frío al momento del corte afectando a este.
En el caso de que esté caliente puede aplicarse criospray para enfriarlo o llevarlo a la nevera unos minutos. Si está frío puede aplicarse calor posando ligeramente la yema del dedo sobre el punto del bloque donde está el tejido.
De igual forma, puede ocurrir que al momento de cortar la cuchilla esté sucia, con mellas, desgastada, o que los tornillos estén flojos; esto da lugar a un corte inestable y puede provocar arrugas al momento del corte que interfieran con el tejido. Puede solucionarse limpiando la cuchilla de otros cortes con ayuda de pinceles o con un papel embebido en una disolución de etanol al 70%, asegurándose de eliminar la parafina restante.
En cuanto al calibrado del equipo, se debe cambiar la cuchilla cada ciertos cortes estimados por el sitio de trabajo y se deben apretar bien los tornillos que la sujetan. Cabe destacar que hay que tener buena técnica al momento de nivelar la cuchilla con el bloque para que toque levemente todos los puntos de este y no haya variaciones de grosor en el corte.
Se puede usar el lado derecho de la cuchilla para el desbastado y el lado izquierdo para el corte en el caso de no tener disponible la cantidad de cuchillas pertinente.
Para evitar roturas también se debe girar lenta y uniformemente la manivela, de manera que se ejerza la misma presión sobre todo el bloque.
También, puede ocurrir que la muestra esté fijada en exceso y el tejido se haya secado, lo que dificulta el corte al microtomo. Puede solucionarse aplicando una gota de agua sobre el bloque en el punto donde está la muestra.
Por último, puede ocurrir que, por motivos ajenos al protocolo, tras el proceso de desparafinación, la muestra se deje en agua o se deje a la intemperie dañando el tejido. Para solucionar esto, los portaobjetos con la muestra deben estar bien custodiados y reservados y, en la medida de lo posible, debe terminarse el protocolo completo del procesamiento de dicha muestra.
Grupo 4
Corte de ojo con tricrómico de Van Gieson con aumento de 20X.
En esta imagen se observa que se ha perdido por completo la morfología del ojo en el momento del corte. Todos los tejidos están rotos o agrietados producto de una fijación excesiva del ojo antes de la inclusión en parafina.
Grupo 4.
Corte de piel teñido con tricrómico de Masson con un aumento de 20x.
En esta imagen destaca que el tejido conectivo de la epidermis se ha roto por completo revelando las fibras de colágeno teñidas en color azúl. Asimismo, se ha perdido la estructura del corte y de sus capas características.
Grupo 4.
Corte de esófago teñido con tricrómico de Masson con un aumento de 20x.
En esta imagen se observa rotura del tejido y diferencias en el grosor del corte debido a una mala técnica de corte en el microtomo.
Errores en el montaje: Burbujas.
Las burbujas en las muestras son un indicativo de un error en la parte final del procesamiento.
Para preservar las muestras de los elementos se utilizan diferentes técnicas de montaje y que así se puedan visualizar durante mucho tiempo, las técnicas más comunes son el montaje con DPX o gelatina (en el caso de muestras con tejido adiposo).
La técnica consiste en aplicar una gota del líquido preservante sobre la sección en el portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos, sin embargo, en este momento pueden generarse burbujas que interfieran en la visualización de la muestra.
Para solucionarlo, lo mejor es que se utilicen pipetas de vidrio y se deje caer una gota del líquido sobre la muestra. Esto evita que el aire en la pipeta penetre en el preservante y se generen burbujas.
Por otro lado, hay que dejar caer el cubreobjetos sobre el pegamento sin moverlo. Puede aplicarse presión uniforme con pequeños golpes sin mover el cubreobjetos para que el preservante se expanda y se eliminen las burbujas.
Es importante dejar el preservante por completo y no retirar el cubreobjetos una vez colocado.
Grupo 4.
Corte de Tráquea teñido con tricrómico de Van Gieson con un aumento 20X.
En esta imagen se observa una burbuja en lo que corresponde a la luz de la tráquea, además de sobre-tinción y rotura del tejido. Para solucionar la sobre-tinción debe respetarse el tiempo y concentración de los reactivos de esta y, experimentalmente, puede cambiarse el protocolo establecido.
Grupo 4.
Corte de ojo teñido con orceína con un aumento de 10x.
En esta imagen se observa el desprendimiento de las capas que conforman el globo ocular, concretamente aquí se ve la parte más distal del ojo.
Destaca la rotura del tejido y la burbuja ubicada en la parte superior izquierda de la imagen.
ERRORES EN EL BAÑO DE FLOTACIÓN: PLEGAMIENTO.
Puede ocurrir que en el baño de flotación, cuando se va a pescar la muestra, la cinta de parafina o el corte se pliuegue sobre sí mismo, dando lugar a plegamientos indeseados en la muestra final. Este error puede provocar fallos diagnósticos o impedir la visibilidad del campo.
Puede ocurrir por una mala técnica de pesca en el baño de flotación o porque el agua esté muy caliente o fría y se produzcan arrugas.
Para solucionarlo el baño debe estar entorno a los 45ºC. Debe introducirse el portaobjetos en un ángulo de 90º (o en transversal) a la muestra en el baño de flotación, luego acercarlo al corte tocándolo y por capilaridad este se adherirá al portaobjetos. Finalmente se debe retirar lentamente del baño con un movimiento firme.
En caso de plegamiento puede solucionarse con pinzas de precisión intentando extender el corte sobre el agua.
Grupo 4.
Corte de tráquea (cartílago hialino) teñido con PAS-Azul Alcián con un aumento 20x.
Esta imagen engloba tres de los errores más comunes en el procesamiento de muestras.
En primer lugar, se observa que es una sección de cartílago hialino desprendida de un corte de tráquea, lo que indica una rotura del corte.
En segundo lugar, se observa que se ha plegado en su parte inferior, por lo que se ha practicado una técnica errónea en la pesca de este corte.
En tercer lugar, se observa que en la parte superior hay un reborde negro, lo que indica el límite de una burbuja producida durante el montaje de la muestra.