1. Fundamento teórico.

Se basa en una técnica de tinción especial, que marca el contraste usando una mezcla de tres colorantes.

• Hematoxilina férrica de Weigert: es un colorante básico que pigmenta las estructuras ácidas. Tiñendo así los núcleos celulares de un color negro.
• Fucsina ácida: es un colorante ácido que pigmenta las estructuras básicas. Tiñendo así el citoplasma y el músculo de color rojo rosado.
• Azul de anilina: es un colorante ácido que pigmenta las estructuras básicas. Tiñendo así las fibras de colágeno de color azul.

Respecto a la utilidad diagnóstica, tiene especial utilidad en el estudio de procesos en los que existe aumento, alteración o redistribución del colágeno, como ocurre en fenómenos de fibrosis, cicatrización, esclerosis o remodelación del tejido conectivo. 

Asimismo, facilita la identificación de estructuras musculares y estromales, siendo de gran ayuda en la valoración morfológica de distintos órganos y tejidos.

2. Materiales

Los materiales utilizados para la realización de la práctica son las siguientes:

• Portaobjetos con la muestra histológica ya preparada.
• Cubreobjetos.
• Vasos de Coplin.
• Pipetas Pasteur o cuentagotas.
• Gradillas o soporte para portaobjetos.
• Pinzas.
• Papel filtro.

Los reactivos utilizados para la realización de la práctica son las siguientes:

• Agua destilada.
• Etanol al 70%.
• Etanol al 96%.
• Etanol al 100%.
• Xileno o xilol.
• Medio de montaje DPX.
• Reactivos del kit comercial para tricrómico de Masson:
  • Reactivo A: Hematoxilina férrica según Weigert, solución A.
  • Reactivo B: Hematoxilina férrica según Weigert, solución B.
  • Solución C: Ácido pícrico.
  • Solución D: Ponceau B.
  • Solución E: Ácido fosfomolíbdico.
  • Solución F: Azul de anilina según Masson.

Los equipos utilizados para la realización de la práctica son los siguientes:

• Campana extractora de gases.
• Microscopio óptico.
• Cronómetro o temporizador.

   3. Protocolo

1. 1. Fijación, inclusión, deshidratación, inclusión en parafina, formación del bloque, corte, desparafinación e hidratación.
   2. Montaje de batería. Se depositan los reactivos correspondientes en vasos de Coplin.
   3. Se realiza por goteo mediante un Kit Comercial.
      1. Poner sobre la sección 6 gotas de reactivo A y 6 de reactivo B [10 minutos].
      2. Sin lavar, escurrir el portaobjetos y poner sobre la sección 10 gotas de solución C [4 minutos].
      3. Lavar rápidamente en H2O destilada, dejando la sección de color amarillo.
      4. Poner sobre el portaobjetos 10 gotas de solución D [4 minutos].
      5. Lavar en H2O destilada.
      6. Poner sobre la sección 10 gotas de solución E [10 minutos].
      7. Sin lavar, escurrir el portaobjetos y poner 10 gotas de solución F [5 minutos].
      8. Lavar en H2O destilada.
      9. Etanol 70º [1 inclusión].
      10. Etanol 96º [1 inclusión].
      11. Etanol 100º [1 minuto].
      12. Xileno (en campana) [10 minutos x 2 inclusiones].
   4. Medio de montaje DPX. Una vez deshidratado y aclarado el corte, se deposita una gotita de medio de montaje DPX sobre la misma preparación. A continuación, se coloca con mucho cuidado el cubreobjetos evitando que se formen burbujas. La muestra se deja secar en posición horizontal hasta que se endurezca completamente, quedando dicha preparación lista para su posterior observación al microscopio óptico.

4. Medidas de seguridad.

Durante el procedimiento de tinción se han de tener en cuenta diferentes medidas de seguridad para proteger al personal. Se utilizan en todo momento los EPI´s, batas, guantes, y si hay riesgos por salpicaduras gafas de protección. 

Los reactivos empleados durante el procedimiento, especialmente el xilol y los alcholes, deben manipularse en zonas bien ventiladas o bajo una campana extractora, evitando de esa manera la inhalación de vapores. Se debe impedir el contacto directo de los reactivos en los ojos, piel y mucosas, y en caso de un derrame accidental, lavar inmediatamente dicha zona afectada con abundante agua.

Está estrictamente prohibido pipetear con la boca, debiendo utilizarse siempre el material adecuado. Los residuos generados durante el procedimiento de la tinción deben eliminarse conforme a la normativa actual de gestión de residuos químicos del laboratorio. Así mismo, los reactivos deben mantenerse etiquetados correctamente y cerrados tras su uso.

  5. Resultados.

Imagen 1:

Piel, 10x.

Se identifican:

• Fibras de colágeno teñidas de azul (Azul de anilina según Masson).
• Queratina y músculo teñidos de rojo/rosa (Ponceau B).
• Citoplasmas de las células teñidos de rosa (Ponceau B).
• Núcleos celulares teñidos de negro (Hematoxilina férrica según Weigert).