Fundamento teórico

• ORCEÍNA: es un tinte natural que se obtiene de líquenes. Se incluye dentro del grupo de colorantes oxazina y tiñe selectivamente pero no específicamente por su carácter catiónico.
  • TIPOS PRINCIPALES:
    • -ORCEÍNA A: Actúa ablandando las membranas celulares, llevando a apoptosis y deteniendo así la división celular. Se usa principalmente, para la visualización estructural de fibras elásticas del tejido conjuntivo, pudiendo diferenciarlas de las del músculo liso. De igual modo, es de gran utilidad en el estudio y seguimiento de infecciones provocadas por el virus de la hepatitis B, ya que reconoce el antígeno de su superficie, el cual aparece como marcador tras la infección por el virus, de manera que los hepatocitos infectados por el virus adquieren una coloración marrón oscura.
    • -ORCEÍNA B: Participa en la finalización de la tinción gracias a su capacidad de unirse a los cromosomas. pudiendo así colorear el corpúsculo de Barr (cromatina sexual ligada al cromosoma X). Como consecuencia, los cromosomas presentan una coloración violeta oscuro/morado, mientras que los demás componentes de la célula muestran un color distinto (según la tinción diferencial utilizada), haciendo posible identificar las diversas etapas de la mitosis.
  • Finalmente, permite reconocer aplicaciones diagnósticas en anatomía patológica ya que se usa en el estudio de vasos sanguíneos, pulmón, piel y cartílago elástico en la búsqueda de enfermedades vasculares, pulmonares y/o hepáticas.

Materiales

• Cestilla de vidrio con asa, espátula, pipeta de vidrio, lápiz, guantes (nitrilo), vaso de precipitados, timer, pipeta Pasteur, vaso de coplin (x2), cubeta de tinción (x7) y tetina (silicona).
• Orceína A y Hematoxilina de Mayer.
• H2O corriente, etanol (70º, 96º y 100º), HCl, xilol, H2O destilada y medio de montaje DPX.

Protocolo de laboratorio

1. En primer lugar, desparafinar y rehidratar las preparaciones. 
2. Tras esto, introducir las muestras en la solución de orceína A durante 45 minutos.
3. A continuación, lavar en agua corriente durante 5 minutos.
4. PREPARACIÓN ALCOHOL ÁCIDO:
   1. Verter 100 ml de alcohol al 70% en un vaso de precipitados y, con una pipeta Pasteur, añadir una gota de HCl al 1%.
   2. Transferir la mezcla resultante a una cubeta de tinción, la cual debe quedar debidamente rotulada.
   3. Realizar tres inmersiones en alcohol ácido (HCl al 1% en alcohol al 70%).
5. Acto seguido, lavar nuevamente en agua (de 1 a 3 inmersiones aproximadamente).
6. Teñir con hematoxilina de Mayer durante 5 minutos.
7. Después, lavar las muestras en agua corriente durante 5 minutos.
8. Posteriormente, sumergir los cortes en alcohol al 70% durante 30 segundos para iniciar la deshidratación.
9. Continuar la deshidratación en alcohol al 96% durante 30 segundos.
10. Completar la deshidratación en alcohol al 100% durante 1 minuto.
11. Aclarar los cortes en xilol en dos pasos de 10 minutos cada uno, el cual deberá hacerse en campana de extracción con guantes de nitrilo.
12. Por último, colocar el medio de montaje (DPX) y cubrir la muestra para su conservación (en campana de extracción, al igual que el paso previo).

Resultados e imágenes

A) Arteria

En esta imagen se observa una muestra de arteria teñida con Orceína y con el aumento 10x, con el fin de poder distinguir con claridad las 3 capas que pertenecen
a la arteria En ella se puede visualizar como las fibras elásticas, especialmente destacables en la lámina media, adquieren unas tonalidades pardo rojizas
resaltando la acción del tinte. Siguiendo con la lámina media, en ella, se aprecian regiones más oscuras debido a un plegamiento del tejido durante su procesamiento,
esto produce un aumento en la concentración de fibras elásticas en dichas zonas y, por ende, un incremento en la absorción de Orceína. La capa adventicia, la cual
contiene escasas fibras elásticas, se tiñe, aunque de manera más sutil con la Orceína, alcanzando una coloración pardo rojiza más pálida. Los núcleos del tejido
conjuntivo y músculo liso, aunque no muy perceptibles, gracias a la Hematoxilina de Mayer utilizada como contratinción, obtienen una tonalidad azul/violácea oscura.
Por último, no se aprecian artefactos, facilitando la correcta visualización del tejido..