Fundamento teórico:

El Luxol Fast-Blue es una tinción especial que demuestra la mielina en el tejido nervioso. Se basa en la interacción lipofílica y electrostática del colorante con los componentes presentes en las vainas de mielina, permitiendo una adhesión selectiva. Esto, permitirá diferenciar la sustancia gris de la sustancia blanca en el tejido nervioso del sistema nervioso central. 

El colorante se une a la mielina mediante enlaces con fosfolípidos por reacciones ácido-base con las lipoproteínas de la mielina. 

El kit de esta tinción se compone de: 

• Solución alcohólica de Luxol Fast Blue: es el colorante principal que tiñe la mielina de un color azul turquesa. Corresponde al reactivo “A”.
• Tampón básico de diferenciación: sirve para eliminar el exceso de Luxol de las estructuras que no contienen mielina. No se entiende como un colorante, sino que controla el contraste. Corresponde al reactivo “B”
• Violeta de cresilo en solución acuosa: se encarga de la tinción de los somas, núcleos y la sustancia de Nissl de color violeta-púrpura. Es un colorante básico que se une a los ácidos nucleicos. Corresponde al reactivo “C”.
• Tampón ácido de activación: este ajusta el pH para favorecer la tinción con el violeta de cresilo mejorando la diferenciación y el contraste final. Al igual que el reactivo “B” no es un colorante. Corresponde al reactivo “D”.

Esta tinción es eficiente para el estudio de alteraciones del sistema nervioso central como la ELA (Esclerosis lateral amiotrófica), lesiones traumáticas, encefalopatías por tumores o inflamación y alteraciones mielínicas congénitas. Asimismo, es útil para diferenciar la arquitectura de la médula espinal.

Materiales:

• EPIs
• Papel de filtro 
• Placas Petri 
• Agua destilada 
• Alcoholes (100º – 96º – 80º – 70º – 50º)
• Xilol
• Medio de montaje DPX
• Pipeta de vidrio con su pera.
• Palillos de madera 
• Gradillas 
• Cubetas de plástico
• Cubreobjetos 
• Kit de Luxol Fast Blue (con reactivos A, B, C, D)

Equipos:

• Campana de seguridad 
• Estufa 

Procedimiento:

1. Desparafinar y llevar las muestras a etanol al 96º.
2. Preparar la cámara húmeda mojando con agua destilada el filtro situado en la placa Petri.
3. Hacer un soporte con palillos y poner el portaobjetos sobre dicho soporte. 
4. Cubrir con reactivo A la sección; cerrar inmediatamente la tapa de la cápsula e incubar en la estufa a 56 °C durante una noche.
5. Sacar de la estufa, extraer el portaobjetos de la cámara húmeda y lavarlo en etanol al 96º, al realizar este paso, deberán disolverse los residuos cristalizados del reactivo A.
6. Lavar en agua destilada durante 1 minuto.
7. Poner sobre la secciones reactivo B, durante 30 segundos.
8. Diferenciar en etanol al 70º hasta obtener las fibras mielínicas en azul sobre un fondo casi incoloro.
   
   Nota: Si la diferenciación resulta dificultosa, repetir 30 segundos en reactivo B y poner el preparado nuevamente en etanol 70°.
   
   
9. Lavar bien en agua destilada (2×1 minutos).
10. Preparar de nuevo la cámara húmeda.
11. Poner sobre el preparado 10 gotas de reactivo C y 5 gotas de reactivo D, durante 20 minutos en la estufa a 56 °C.
12. Diferenciar el preparado en etanol 96° para que los cuerpos de Nissl tornen a un color rosa pálido, durante 1 minuto.
13. Sumergir en etanol al 100% durante 1 minuto.
14. Sumergir en Xilol (2×2 minutos).
15. Montar las muestras con medio de montaje DPX en campana y con pipeta de vidrio.
16. Observar al microscopio.

Resultados e imágenes