1. Fundamento teórico.

Se basa en una técnica de tinción de rutina, mediante el contraste de ácidos y bases.

• Hematoxilina de Mayer: es un colorante básico que pigmenta las estructuras ácidas. Tiñendo así los núcleos celulares de un color azul oscuro o púrpura.
• Eosina: es un colorante ácido que pigmenta las estructuras básicas. Tiñendo así, las siguientes estructuras:
  • El citoplasma de color rosado.
  • El colágeno de color rosa pálido.
  • El músculo de color rosa fuerte o fucsia.
  • La queratina de color rojo intenso.
  • Los eritrocitos de color rojo cereza.

Respecto a la utilidad diagnóstica, gracias al contraste entre ambos colorantes, se consigue una adecuada diferenciación nuclear, citoplasmática y extracelular, lo que facilita el estudio de lesiones inflamatorias, alteraciones degenerativas, procesos neoplásicos y cambios estructurales de los tejidos.

Asimismo, permite observar con nitidez aspectos como el tamaño y forma nuclear, la relación núcleo/citoplasma, la disposición celular, la presencia de mitosis, necrosis, infiltrado inflamatorio y alteraciones del estroma. Por ello, se emplea como técnica básica inicial en el diagnóstico histopatológico y como punto de partida para la selección de otras técnicas especiales o inmunohistoquímicas complementarias.

Además, puede utilizarse como contratinción en determinados procedimientos histológicos, aportando contraste y facilitando la interpretación microscópica de las estructuras tisulares.

2. Materiales

Los materiales utilizados para la realización de la práctica son las siguientes:

• Portaobjetos con muestra biológica ya preparada.
• Cubreobjetos.
• Cestas de tinción.
• Vasos de Coplin.
• Pipetas Pasteur o cuentagotas.
• Gradillas o soporte para portaobjetos.
• Papel de filtro.
• Pinzas.

Los reactivos utilizados para la realización de la práctica son los siguientes:

• Agua corriente.
• Agua destilada.
• Etanol al 70%.
• Etanol al 96%.
• Etanol al 100%.
• Xilol o xileno.
• Hematoxilina de Mayer.
• Eosina al 0,2%.
• Medio de montaje DPX.

Los equipos utilizados para la realización de la práctica son los siguientes:

• Campana extractora de gases.
• Balanza de precisión.
• Microscopio óptico.
• Cronómetro o temporizador.

3. Protocolo.

1. 1. Fijación, inclusión, deshidratación, inclusión en parafina, formación del bloque, corte, desparafinación e hidratación.
   2. Montaje de batería. Se depositan los reactivos correspondientes en vasos de Coplin.
      Se debe preparar la eosina; para ello, se pesan 2 gramos de eosina en polvo y se disuelven en 20 mililitros de agua destilada, luego se añaden 80 mililitros de etanol 96º y se mezcla.
   3. Se sumergen las muestras en el siguiente orden de reactivos:
      1. Hematoxilina de Mayers [5 a 10 minutos].
      2. Agua corriente [15 minutos].
      3. H2O destilada [1 minuto x 2 inclusiones].
      4. Eosina al 0.2% [30 segundos a 2 minutos].
      5. Etanol 70º [20 segundos].
      6. Etanol 96º [20 segundos].
      7. Etanol 100º [3 minutos x 2 veces].
      8. Xileno (en campana) [10 minutos x 2 inclusiones]. 
   4. Medio de montaje DPX. Una vez deshidratado y aclarado el corte, se deposita una gotita de medio de montaje DPX sobre la misma preparación. A continuación, se coloca con mucho cuidado el cubreobjetos evitando que se formen burbujas. La muestra se deja secar en posición horizontal hasta que se endurezca completamente, quedando dicha preparación lista para su posterior observación al microscopio óptico.

4. Medidas de seguridad.

Durante el procedimiento de tinción se han de tener en cuenta diferentes medidas de seguridad para proteger al personal. Se utilizan en todo momento los EPI´s, batas, guantes, y si hay riesgos por salpicaduras gafas de protección. 

Los reactivos empleados durante el procedimiento, especialmente el xilol y los alcholes, deben manipularse en zonas bien ventiladas o bajo una campana extractora, evitando de esa manera la inhalación de vapores. Se debe impedir el contacto directo de los reactivos en los ojos, piel y mucosas, y en caso de un derrame accidental, lavar inmediatamente dicha zona afectada con abundante agua.

Está estrictamente prohibido pipetear con la boca, debiendo utilizarse siempre el material adecuado. Los residuos generados durante el procedimiento de la tinción deben eliminarse conforme a la normativa actual de gestión de residuos químicos del laboratorio. Así mismo, los reactivos deben mantenerse etiquetados correctamente y cerrados tras su uso.

5. Resultados.

Imagen 1:

Riñón H&E, 40x

Se identifican: 

• Citoplasma de células tubulares teñido de rosa (Eosina).
• Fibras de colágeno teñidas de rosa claro (Eosina).
• Núcleos celulares teñidos de púrpura/azulado (Hematoxilina).