Fundamento teórico: 

El Sudán III es un colorante lipofílico (soluble en grasas) de color rojo-anaranjado, utilizado para detectar lípidos. Al ser insoluble en agua, se disuelve en las grasas, tiñéndose, lo que permite visualizar la presencia de triglicéridos y otras grasas en muestras biológicas como tejidos o heces. Además de triglicéridos, se pueden localizar ésteres de colesterol, gotas lipídicas intracelulares y tejidos adiposos. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tiñe las grasas de un color rojo-anaranjado.

La tinción de Sudán III se utiliza clínicamente para la detección cualitativa de presencia de grasas en las heces y en tejidos. Por lo que ayuda en: 

• Diagnóstico de esteatorrea: detecta la presencia de triglicéridos y ácidos grasos no digeridos durante la digestión, que indican una malabsorción de nutrientes en alguna parte del intestino. 
• Evaluación de insuficiencia pancreática exocrina: falta de producción de lipasa por parte del páncreas para la digestión de las grasas. 
• Enfermedades del intestino delgado: diagnóstico de afecciones del intestino delgado, como celiaquía, síndrome del intestino corto o infecciones parasitarias que causan diarrea crónica.

Materiales: 

•  Sudan III:

• • 0,5 g Sudán III
  • 100 mL de etanol 70%

• Medio de montaje de gelatina: 

• • 10 g de gelatina 
  • 70 mL de glicerina 
  • 60 mL de agua destilada

• Margarina ( no hay muestras procesadas para lípidos)
• Agua → frasco lavador  
• Balanza y vidrio de reloj 
• 2 vasos de precipitados 
• Probeta 
• Pipetas pasteur y pipetas de vidrio (medio de montaje) 
• Varillas de agitación o agitador magnético
• Embudo 
• Baño maría  
• Portaobjetos y cubreobjetos 
• Pinzas 
• Gradilla 
• Cubeta de tinción 
• EPIs
• Papel de filtro

Medidas de seguridad:

• Uso de guantes de nitrilo o vinilo.
• Uso de bata adecuada para el laboratorio.
• Pelo recogido y uñas recortadas.
• Uso de la campana de flujo laminar (CFL) a la hora de realizar el montaje.

Procedimiento 

Para preparar el colorante (0,5 g en 100 ml):

1. Pesar 0,5 g de Sudán III
2. Añadir los 0,5g de Sudán III a 100 mL de etanol al 70-80%.
3. Agitar bien.
4. Dejar reposar 12-24h.
5. Filtrar.
6. Guardar en frasco oscuro.

Para preparar el medio de montaje (gelatina glicerinada):

1. Hidratar 10 g de gelatina en 60 mL de agua destilada durante 1h
2. Calentar al baño maría hasta disolver
3. Añadir 70 mL de glicerina
4. Mezclar
5. Dejar enfriar 

Para realizar la tinción:

1. En caso de ser un tejido: las muestras deben ser frescas para poder identificar los lípidos. Se deberá incluir el tejido fresco en un líquido con  una sustancia crioprotectora para evitar daños en el tejido, luego se cortará con un criostato y se pasarán los cortes a un portaobjetos. Seguidamente se realizará el protocolo de la tinción.
2. Realizar un frotis de margarina sobre portaobjetos.
3. Añadir Sudán III hasta cubrir la muestra con la pipeta Pasteur (por goteo) / colocar los portaobjetos dentro de la cubeta de tinción (inmersión). En cualquiera de los casos se dejará actuar durante 1 hora.
4. Lavar con agua destilada suavemente con ayuda del frasco lavador. 
5. Montaje: en la CFL añadir 1 gota de gelatina glicerinada caliente con una pipeta de vidrio.
6. Colocar cubreobjetos

Resultados e imágenes